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                      【ISCO】將TLC與等度洗脫分離相關(guān)聯(lián)Rf到CV轉(zhuǎn)換

                       更新時間:2024-09-24 點擊量:787
                      一、應(yīng)用概述

                      在使用Teledyne ISCO的CombiFlash®系統(tǒng)時,或者在純化沒有色團的化合物時,可以使用薄層色譜法(TLC)來定位收集到的餾分中的純化化合物。


                         

                      如果已知化合物的保留因子(Rf),則可以根據(jù)柱體積估計含有所需物質(zhì)的餾分收集管。柱體積是裝填柱的空隙(空余)體積。這一規(guī)格在所有RediSep®色譜柱的色譜應(yīng)用說明3中都有列出。


                         

                      了解Rf和柱體積可以讓您大致了解化合物可能位于哪些餾分收集管的范圍。


                         

                      二、一般方法    

                      將待分離的化合物加載到TLC板上,并分離成幾個種類。


                         

                      控制參數(shù)    

                      TLC的幾個參數(shù)必須保持一致以獲得良好的相關(guān)性。

                      • TLC溶劑應(yīng)以體積比的方式量取,以便混合物在轉(zhuǎn)移到梯度生成系統(tǒng)時保持恒定。

                      • 為了獲得最佳結(jié)果,建議對層析室和板進行平衡。

                      • 推薦將板運行至距離板頂部1-4厘米以內(nèi),以實現(xiàn)良好的分離。

                      • 在運行板之前,應(yīng)標記樣品斑點位置和溶劑水平。

                      • 應(yīng)在運行結(jié)束時標記溶劑洗脫高度和樣品斑點位置。

                      • 在進行TLC時,層析室中的溶劑水平絕不能觸及樣品,并且應(yīng)覆蓋層析室以維持氣相中的平衡。


                         

                      假設(shè)    

                      有幾個假設(shè):

                      • 色譜柱和TLC板使用相同類型的固定相。

                      • TLC方法中使用的溶劑與液體分離中使用的溶劑相同。

                      因此,液體分離必須是等度洗脫。

                      • TLC的Rf應(yīng)小于0.5且大于0.1,如果不是這樣,則可能需要不同的溶劑系統(tǒng)。


                         

                      Rf    

                      Rf — 保留因子。樣品斑點移動的距離。Rf通過以下公式計算:

                         

                      Zx — 斑點從其起始點(樣品線)移動的距離。請參考圖1和圖2。
                         

                      Zf — 從原始溶劑線到最終溶劑前沿的距離。

                      Z0 — 從溶劑線到樣品線的距離。

                             

                      圖1:TLC起始

                         

                      圖2:TLC完成


                      柱體積相關(guān)性    

                      一旦知道了混合物中某個組分的Rf,就可以與柱體積(CV)建立相關(guān)性。


                         

                      如果Rf值在0.1和0.5之間,它可以被輸入到以下公式中,以給出收集管的范圍。

                         

                      其中:

                      Volc — 柱的空隙體積。

                      Volf — 每個管中收集的餾分體積。


                         

                      三、示例 

                      請參考圖3。


                         

                      圖3:TLC示例


                      一個丙酮斑點洗脫了62毫米(Zx=62毫米),溶劑水平到水平樣品線的距離是8毫米(Z0=8毫米),溶劑前沿移動的距離是170毫米(Zf=170毫米)。Rf是無量綱的,所以單位被省略,進行計算:


                         


                      為了將這與通過柱體積為16.8 mL的12克RediSep柱進行的純化相關(guān)聯(lián),并收集為10 mL的餾分,將Rf應(yīng)用到以下公式中:


                         
                         


                      四、計算機

                      人們可以輕松使用Microsoft® Excel®或其他電子表格程序來創(chuàng)建Rf和試管相關(guān)性計算器:


                         

                      圖4:Rf和試管相關(guān)性計算器


                         

                      五、參考    

                      Colin F. Poole and Salwa K. Poole, “Chromatography Today", Elsevier Science Publishers B.V., 649-667, (1991).

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