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                      酵母菌破壁方法的革新

                       更新時(shí)間:2017-03-22 點(diǎn)擊量:2916

                          酵母菌是基因表達(dá)研究和重組蛋白生產(chǎn)的通用宿主。然而,傳統(tǒng)酶解法進(jìn)行酵母mRNA和內(nèi)容蛋白提取通常非常困難。我們以細(xì)胞總RNA提取為例,對(duì)各種酵母破壁方法進(jìn)行比較。我們用不同的方法對(duì)酵母菌破壁,然后用Trizol試劑進(jìn)行RNA的提取,zui后進(jìn)行電泳檢測(cè),發(fā)現(xiàn)不同破壁方法效果如下:

                       

                      SPEX公司Freezer/Mill冷凍研磨儀將上述液氮研磨法進(jìn)一步改良,使酵母破壁這樣的實(shí)驗(yàn)更加簡(jiǎn)單,無(wú)人值守即可完成。將樣品裝入密閉的研磨容器,浸入液氮,采用電磁振蕩技術(shù),電磁往復(fù)驅(qū)動(dòng)鋼制撞子,振蕩裝機(jī)樣品,動(dòng)能慣性更大,實(shí)現(xiàn)高動(dòng)能撞子大面積撞擊,快速粉碎研磨。過(guò)程中,樣品始終處于液氮溫度(-196°C)。

                       

                       

                      實(shí)驗(yàn)方法:

                      *步:將樣品研磨罐預(yù)冷凍。

                      第二步:將酵母菌液加入液氮中,控制速度,使菌液進(jìn)入液氮中后形成小顆粒。將菌體液氮顆粒轉(zhuǎn)入研磨罐中。放入冷凍研磨儀的樣品倉(cāng)。

                      第三步:設(shè)置研磨程序,預(yù)冷10-15min,研磨2min15個(gè)循環(huán),兩次研磨之間間歇1min

                       

                      實(shí)驗(yàn)結(jié)果:

                      經(jīng)檢驗(yàn),用此法能使得90%以上的酵母細(xì)胞破壁。酵母的RNA和細(xì)胞內(nèi)蛋白保持高活性。

                       

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